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外泌體（exosome），是指直徑在40-150nm的盤(pán)狀囊泡。外泌體內(nèi)部包裹了蛋白質(zhì)、mRNA和microRNA等物質(zhì)，目前基于質(zhì)譜的蛋白質(zhì)組學(xué)是研究外泌體不可或缺的一項(xiàng)技術(shù)。

本實(shí)驗(yàn)室采用Thermo Scientific Q Exactive plus 組合型四吸桿orbitrap質(zhì)譜儀進(jìn)行外泌體蛋白質(zhì)質(zhì)譜檢測(cè)。根據(jù)客戶需求本公司可提供不同的檢測(cè)方法：

一種是非標(biāo)定量法（Label-Free），該方法是近年來(lái)重要的蛋白定量方法，該技術(shù)無(wú)需昂貴的同位素標(biāo)簽做內(nèi)標(biāo)，提高了低豐度蛋白質(zhì)的檢測(cè)效率和蛋白質(zhì)定量的準(zhǔn)確性。非標(biāo)定量法是通過(guò)比較質(zhì)譜分析次數(shù)或質(zhì)譜峰強(qiáng)度，分析不同來(lái)源樣品蛋白的數(shù)量變化，認(rèn)為肽段在質(zhì)譜中被捕獲檢測(cè)的頻率與其在混合物中的豐度成正相關(guān)，因此蛋白質(zhì)被質(zhì)譜檢測(cè)的計(jì)數(shù)反映了蛋白質(zhì)的豐度，通過(guò)適當(dāng)?shù)臄?shù)學(xué)公式可以將質(zhì)譜檢測(cè)計(jì)數(shù)與蛋白質(zhì)的量聯(lián)系起來(lái)，從而對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行定量。

另一種是標(biāo)記定量法（iTRAQ/TMT），iTRAQ/TMT試劑由三部分組成：報(bào)告基團(tuán)、平衡基團(tuán)和反應(yīng)基團(tuán)。反應(yīng)基團(tuán)形成2-10種等質(zhì)量同位素標(biāo)簽。iTRAQ/TMT試劑標(biāo)記酶解后的肽段，可與氨基酸N端及側(cè)鏈的伯胺基團(tuán)發(fā)生反應(yīng)。在一級(jí)譜圖中，來(lái)自于不同樣本的同一肽段，標(biāo)記后表現(xiàn)為相同的質(zhì)荷比。在二級(jí)譜圖中，報(bào)告基團(tuán)、平衡基團(tuán)和反應(yīng)基團(tuán)之間的鍵斷裂，帶不同同位素標(biāo)簽的同一肽段產(chǎn)生質(zhì)量不同的報(bào)告離子，根據(jù)報(bào)告離子的豐度可獲得樣本間相同肽段的定量信息，再經(jīng)過(guò)軟件處理得到蛋白質(zhì)的定量信息。